Phenyl Beads 6FF (Low Sub)的预装柱

货号：YA2620

规格：1x1mL/1x5mL/5x1mL/5x5mL

保存：2°C - 8°C

产品介绍

Butyl Beads 4FF、Octyl Beads 4FF和Phenyl Beads 6FF(Low Sub) 都属于疏水层析介质（Hydrophobic Interaction Chromatography，简称HIC），主要通过分子表面疏水性差别进行分离纯化的一类疏水层析介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质和多肽的分离纯化。本产品均可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。

Phenyl Beads 6FF(Low Sub) 分别是低取代的芳香族疏水层析介质和高取代的芳香族疏水层析介质，其中苯基通过不带电、化学性质稳定的醚键连接至高度交联的6%琼脂糖微球上。可根据不同物质的分离要求、分离效率和结合载量不同来选择高取代或低取代的苯基疏水层析介质。

产品性能

纯化流程（仅供参考）

1 缓冲液的准备：

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45 μm 滤膜过滤。

平衡/洗杂液：0.05M 磷酸盐，1.7M 硫酸铵，pH7.0

洗脱液：0.05M 磷酸盐，pH7.0

注：疏水层析介质缓冲液可根据不同介质及纯化物质不同做适当改变，原则上高盐上样低盐洗脱。

2 样品准备：

样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

样品中盐浓度跟平衡液相同，通常为 0.5-2.0M 硫酸铵。

3 样品纯化：

1) 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2) 用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。

3) 使用至少5倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。

4) 利用泵或样品环上样。注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

5) 用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10-15 个柱体积）。

注：在样品和结合缓冲液中加入咪唑可以提高样品纯度。

6) 用洗脱液采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。梯度洗脱可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

4  SDS-PAGE检测：

将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使SDS-PAGE 检测纯化效果。

填料清洗 

疏水层析树脂每次使用后可以用分别用2-3倍柱体积的30%异丙醇、3 倍去离子水清洗， 然后用至少3倍柱体积的Buffer进行平衡。

CIP（Cleaning-In-Place）清洗

疏水层析树脂可以重复使用，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行CIP 清洗。

1. 去除一些沉淀或变性物质：用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗(至少浸泡4小时)，用3-4 倍柱体积的去离子水清洗, 然后用至少3倍柱体积的平衡液进行平衡。

2. 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质： 用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的 1% Triton X-100 的0.1M 醋酸盐清洗（至少1-2 小时），用3-4倍柱体积的去离子水清洗, 然后用至少3倍柱体积的平衡液进行平衡。